Per la ricerca delle mutazioni descritte si esegue inizialmente una reazione enzimatica di amplificazione del DNA, conosciuta come Polymerase Chain Reaction (PCR), che consente di amplificare in vitro una specifica regione della molecola, copiandola in varie fasi successive, fino ad ottenerne milioni di copie. Successivamente i prodotti di PCR così ottenuti vengono sottoposti ad analisi di sequenza automatizzata mediante l’impiego di un sequenziatore automatico a tecnologia fluorescente. L’analisi di mutazione viene effettuata mediante analisi comparativa tra le sequenza ottenute per il campione in esame e le sequenze di riferimento dei geni investigati, depositate nel database internazionale GeneBank. Attualmente la tecnica di sequenziamento Sanger rappresenta il GOLD STANDARD in campo diagnostico per la ricerca di mutazioni perché è l’unica tecnica che consente di rilevare mutazioni con un’accuratezza maggiore dell 99,99%. Sebbene sia possibile rilevare mutazioni anche con altre tecniche (Utilizzo di sonde fluorescenti, analisi delle curve di melting, Next generation sequencing, …) tuttavia il metodo Sanger rimane l’unico metodo con le più elevate sensibilità e specificità tanto da dover essere utilizzato a supporto e riconferma delle mutazioni rilevate con gli altri metodi. L’accuratezza del sequenziamento Sanger, inoltre, può essere monitorata attraverso la valutazione del Quality Value che è un’espressione della probabilità di errore di una sequenza e che può essere impostato in maniera tale da ridurre la probabilità di errore a meno dello 0,01%.